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日期20020613名称外源性污染有毒有害物质的检验
副类别饲料中有毒有害物质的检验类别饲料质量检验
资料来源中国饲料数据库情报网中心
内容正文 外源性污染有毒有害物质的检验

  (一)饲料中铅含量的测定

  1,原理 样品经消解处理后,再经萃取分离,然后导人原子吸收分光光度计中,原子化后测量其在波长283.3nm处的吸光度,与标准系列比较定量。
  2.测定

  (1)铅标准贮备液:精确称取0.159 8g硝酸铅(HG3-1070),加6mol/L硝酸lOml,全部溶解后,转入1000ml容量瓶中,加水到刻度,该溶液为0.1mg/ml铅;
  铅标准工作液:精确吸取lml铅标准储备液,加入100ml容量瓶中,加水至刻度,此溶液为lμg/ml铅。
  (2)试样处理
  ①配合饲料及鱼粉试样处理:称取4g样品,精确到0.001g,置于瓷坩埚中缓慢加热至炭化,在500℃高温下加热18h,直至试样呈灰白色,冷却。用少量水将炭化物湿润,依次加入5ml硝酸、5ml高氯酸,用表面皿盖住,在砂浴或加热装置上加热,待消解完全后,去掉表面皿,至近干涸。加lmol/L盐酸10ml,使盐类溶解,把溶液转入50ml容量瓶中,用水冲洗烧杯多次,加水至刻度。用中速滤纸过滤,待用。
  ②磷酸盐、石粉试样处理:称取5g样品,精确到0.001g,放人消化管中,加入5ml水,使样品湿润,依次加入20ml硝酸、5ml硫酸,置4h后加入5ml高氯酸,放在消化装置上加热消化。在150℃温度恒温消化2h,然后将温度缓缓升到300℃,在300℃下恒温消化,直至样品发白近干为止,取下消化管,放冷。加入lmol/L盐酸10ml,在150℃度下加热,使样品中盐类溶解后将溶液转入50ml容量瓶中,用水冲洗消化管,将冲洗液并人容量瓶中,加水至刻度。用中速滤纸过滤后,备作原子吸收用。
  3.步骤 精确吸取5~10ml样品溶液和试剂空白液加入到容量瓶中,按绘制标准曲线步骤进行测定,测出相应吸光值和标准曲线比较定量(参见中华人民共和国国家标准GB/T13080-1991)。
  (二)饲料中总砷的测定

  1.原理 样品经消解后,碘化钾、氯化亚锡将高价砷还原为三价砷,然后与由锌粒和酸反应生成生态氢与砷作用生成砷化氢,经银盐溶液吸收后,形成黄色或棕红色络合物,与标准系列比较定量。
  2.测定步骤
  (1)砷标准储备液:精确称取0.0660g在110℃干燥过2h的三氧化二砷,加5ml 20%氢氧化钠溶液,溶解后加25ml 6%硫酸,移人500ml容量瓶中,加水至刻度。此溶液每毫升相当于lmg砷。
  砷标准工作液:精确吸取5ml砷标准储备液,置于100ml容量瓶中,加水定容。精确吸取此溶液2ml于100ml容量瓶中,加lml盐酸,加水定容。此溶液每毫升相当于lμg砷。
  (2)试样处理
  ①混合酸消解法:配合饲料及植物性单一饲料,宜采用硝酸一硫酸一高氯酸(23:3:4)消解法。称取3~4g试样,置于250ml凯氏瓶中,加水少许湿润试验,加入30ml混合酸,放置4h以上或过液,置电炉上从室温开始消解。待棕色气体消失后,提高温度至冒白烟数分钟(务必赶尽硝酸),此时溶液应清亮五色或淡黄色,瓶内溶液体积近似硫酸用量,残渣为白色。冷却,加10ml lmol/L盐酸,煮沸,稍冷,转移至50ml容量瓶中,洗涤凯氏瓶3~5次,洗液并人容量瓶中,定容,摇匀,待测。
  试样消解液含砷小于10μg时,可直接转移到砷化氢发生器中,补加7ml盐酸,加水使瓶内溶液体积为40ml,从加碘化钾起按操作步骤进行。
  ②盐酸溶样法:磷酸盐、碳酸盐和微量元素添加剂不宜加硫酸,应用盐酸溶样。称取1~3g试样,置于100ml高型烧杯中,加水少许湿润样品,慢慢滴加10ml 3mol/L盐酸溶液,待激烈反应过后,再缓慢加入8ml盐酸,用水稀释至约30ml,煮沸。转移到50ml容量瓶,洗涤烧杯3-4次,洗液并人容量瓶中,定容,摇匀,待测。
  试样消解液含砷小于10μg时,可直接在发生器中溶样,用水稀释到40ml并煮沸,从加碘化钾起按操作步骤进行。
  少量富含硫的矿物质饲料干扰测定,可在溶样后往高型烧杯中加入5ml硫酸铅溶液,静置20min,形成硫化铅沉淀过滤除之,滤液定容至50ml,以下按操作步骤进行。
  ③干灰化法:预混料、浓缩饲料(配合饲料)可选此法。称取2~3g试样于30ml瓷坩埚中,低温炭化至无烟后,加入5ml硝酸镁溶液,混匀,于低温或沸水浴中蒸干,转入高温炉于550℃恒温灰化3.5~4h,冷却,缓慢加入10ml 3mol/L盐酸溶液,待激烈反应过后,煮沸并转移至50ml容量瓶,洗涤坩埚3~5次,洗液并人容量瓶中,定容,摇匀,待测。
  试样含砷小于10μg时,可直接转移到发生器中,补加8ml盐酸,加水至40ml,加入1g抗坏血酸溶解后,按操作步骤进行。
  ④还原反应与比色测定:上述待测液中,准确吸取适量溶液(含砷量应≥1.0μg)于砷化氢发生器中,补加盐酸至总量为10ml,用水稀释至40ml,使溶液中盐酸浓度为3mol/L,然后向试样溶液、空白、标准系列溶液中各加入2ml 15%碘化钾溶液,摇匀,加入lml氯化亚锡溶液,摇匀,静置15min。准确吸取5ml Ag-DDTC吸收液于吸收瓶中,连接好装置,加无砷锌粒反应,用三氯甲烷定容至5ml,摇匀,以吸收液为参比,在520nm处比色测定(参见中华人民共和国国家标准GB/T 13079-1999)。
  (三)饲料中汞含量的测定

  1.原理 在原子吸收光谱中,汞原子对波长253.7nm的共振线有强烈的吸收作用。试样经硝酸一硫酸消化,使汞转为离子状态,在强酸中,氯化亚锡将汞离子还原成元素汞,以干燥清洁空气为载体吹出,进行冷原子吸收,定量。
  2.测定
  (1)汞标准贮备液:准确称取干燥器内干燥过的二氯化汞0.135 4g,用混合酸液溶解后移人100ml容量瓶中,稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于lmg汞,冷藏备用。
  汞标准工作液:吸取10ml汞标准贮备液,置于100ml容量瓶中,加混合酸液稀释至刻度,此溶液每毫升相当于10μg汞。再吸取此液10ml,置于100ml容量瓶中,加混合酸液稀释至刻度,此溶液每毫升相当于0.1μg汞,临用时现配。
  (2)试样处理:称取1~5g试样,精确到0.001g,置于三角烧瓶中,加玻璃珠数粒,依次加25ml硝酸、5ml硫酸,转动三角烧瓶并防止局部炭化,装上冷凝管,小火加热,待开始发泡即停止加热,发泡停止后,再加热回流2h。放冷后从冷凝管上端小心加20ml水,继续加热回流10min,放冷,用适量水冲洗冷凝管,洗液并人消化液。消化液经玻璃丝棉或滤纸滤于100ml容量瓶内,用少量水洗三角烧瓶和滤器,洗液并人容量瓶内,加水至刻度,混匀。取试样相同量的硝酸、硫酸,同法做试剂空白试验。
  若为石粉,称取约1g试样,精确到0.001g,置于三角烧瓶中,加玻璃珠数粒,装上冷凝管后,从冷凝管上端加入15ml硝酸,用小火加热15min,放冷,用适量水冲洗冷凝管,移人100ml容量瓶内,加水至刻度,混匀。
  (3)步骤:加10ml试样消化液于还原瓶内,加2ml氯化亚锡溶液后立即盖紧还原瓶2min,记录测汞仪读数指示器最大吸光度(参见中华人民共和国国家标准 GB/T 13081-1991)。
  (四)饲料中氟含量的测定

  1.原理 氟离子选择电极的氟化镧单晶膜对氟离子产生选择性的对数响应,氟电极和饱和甘汞电极在被测试液中,电位差可随溶液中氟离子的活度变化而改变,电位变化规律符合能斯特方程式。
  与氟离子形成络合物的Fe3+、A13+及SiO32-等离子干扰测定,其他常见离子无影响。测量溶液的酸度为pH5~6,用总离子强度缓冲液消除干扰离子及酸度的影响。
  2.测定
  (1)氟标准贮备液:称取经100℃干燥、冷却4h的氟化钠0.221 0g,溶于水后,移人100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀,置冰箱内保存,此液相当于lmg/m!氟。
  氟标准溶液:临用时准确吸取氟贮备液10ml于100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀。此液相当于100μg/ml氟。
  氟标准稀溶液:准确吸取氟标准溶液10ml于100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀。此液相当于10μg/ml氟。
  氟标准工作液的制备:吸取氟标准稀溶液0ml、lml、2.5ml、5ml和10ml(相当于0μg、10μg、25μg、50μg和100μg氟),再吸取氟标准溶液2.5ml、5ml、10ml和氟标准贮备液2.5ml相当于(250μg、500μg、1 000μg 和2 500μg氟),分别置于50ml容量瓶中,于各容量瓶中分别加入lmol/L盐酸10ml,总离子强度缓冲液25ml,加水至刻度,混匀。上述2组标准工作液的浓度分别为每毫升相当于0μg、0.2μg、0.5μg、lμg 、2μg 、5μg 、10μg 、20μg和50μg氟。
  (2)试液制备:称取0.5~1g试样,精确到0.001g,置于50ml纳氏比色管中,加入1mol/L盐酸10ml,密闭提取1h(不时轻轻摇动比色管),应尽量避免样品黏于管壁上。提取后加总离子强度缓冲液25ml,加水至刻度混匀,以滤纸过滤,滤液供测定使用。
  (3)步骤:将氟电极和甘汞电极与测定仪器的负端和正端联接,将电极插入盛有水的50ml聚乙烯塑料烧杯中,并预热仪器,在磁力搅拌器上以恒速搅拌,读取取衡电位值,更换2~3次水,待电位值平衡后,即可进行标准样品和样液的电位测定。
  由低到高浓度分别测定氟标准工作液的平衡电位。以电极电位作纵坐标,氟离子浓度作横坐标,在半对数坐标纸上绘制标准曲线。同法测定试液的平衡电位,从标准曲线上读取试液的含氟量(参见中华人民共和国国家标准GB/T13083-1991)。
  (五)饲料中钼含量的测定

1.原理 饲料中钼的测定,是将饲料经HNO3 一HClO4 消化,然后把剩余的残余物用盐酸溶解。硫氰酸盐与钼作用时,在还原剂作用下成为橙黄色络合物,然后用异戊醇溶剂萃取,最后用分光光度计比色测定溶液中钼的含量。
2.步骤
(1)钼的标准溶液:称取0.184g钼酸铵溶于水中,用水稀释,定容于1000ml容量瓶中,则钼的浓度为100μg/ml。吸取100μg/ml钼溶液10ml于500ml容量瓶中,用无离子水定容至刻度即为2μg/ml的钼标准溶液。
(2)步骤:称取5g试样于200ml高型烧杯中,加入35ml硝酸,盖上表玻璃,静置15min,同时作试剂空白,在调温电炉上小心加热,待泡沫平息后,继续加热至溶解到大部分固体消失为止,冷却至室温,如样品已近蒸干,加入10ml硝酸和6ml高氯酸,盖上表玻璃,缓慢加热煮沸,直到溶解完全,溶液应为无每或浅黄色。继续蒸发至残渣刚干或稍带湿润为止,冷却,用少量水冲洗烧杯内壁和表玻璃,再煮沸几分钟,冷却后用少量水冲洗。加入2滴甲基橙,用氨水中和,边搅拌边加入(1+1)盐酸溶液,直至溶液刚好呈酸性,在多加8.2ml,使最后的溶液含约3%盐酸,并加入2ml氟化钠饱和溶液。将溶液转入125m1分液漏斗,用水稀释至50ml,加入4ml 20%硫氰化钾溶液,混匀,加入1.5ml 20%氯化亚锡溶液,混匀并准确加入15ml异戊醇充分振荡lmin,分层弃去水相。向有机相中加入25ml新配制的0.8%氯化亚锡溶液,轻振15s,分层弃去水相,将有机相转入离心管,以2000rpm转速离心15min,除去水滴,于465nm处以异戊醇为参比,测定其吸光度。
(3)标准曲线:根据需要用钼的标准溶液配制。
⑷计算:从标准曲线上查得钼的含量,计算(参见中华人民共和国国家标准GB/T17777-1999)。
  (六)饲料中镉含量的测定

  1.原理 以干灰化法分解样品,在酸性条件下,有碘化钾存在时,镉离子与碘离子形成络合物,被甲基异丁酮萃取分离,将有机相喷人空气乙炔火焰,使镉原子化,测定其对特征共振线228.8nm的吸光度,与标准系列比较求得镉的含量。
  2.测定
  (1)镉标准贮备液:称取高纯金属镉(Cd,99.99%)0.1g于250ml三角烧瓶中,加入10ml 1:1硝酸,在电热板上加热溶解完全后蒸干,取下冷却后,加入20ml 1:1盐酸及20ml水,继续加热溶解,取下冷却后,移人1 000ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,此溶液每毫升相当于100μg镉;
镉标准中间液:吸取10ml镉标准贮备液于100ml容量瓶中,以lmol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,此溶液每毫升相当于10μg镉。
  镉标准工作液:吸取10ml镉标准中间液于100ml容量瓶中,以lmol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,此溶液每毫升相当于lμg镉。
  (2)试样处理:准确称取5~10g试样于100ml硬质烧杯中,置于马福炉内,微开炉门,由低温开始,先升至200℃保持1h,再升至300℃保持1h后升温至500℃灼烧16h,直至试样成白色或灰白色,无碳粒为止。
  取出冷却,加水润湿,加10ml硝酸,在电热板或砂浴上加热分解试样至近干,冷却后加10ml lmol/L盐酸溶液,将盐类加热溶解,内容物移人50ml容量瓶中,再以lmol/L盐酸溶液反复洗涤烧杯,洗液并人容量瓶中,以lmol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀备用。
  若为石粉、磷酸盐等矿物试样,可不用干灰化法,称样后加10~15ml硝酸(或盐酸),在电热板或砂浴上加热分解试样至近干,其余同上处理。
  (3)步骤:精确分取15~20ml待测试样溶液及同量试剂空白溶液于25ml具塞比色管中,依次加入2ml碘化钾溶液,其余同标准曲线绘制测定步骤(参见中华人民共和国国家标准 GB/T13082-1991)。
  (七)饲料中铬含量的测定

  1.原理 以干灰化法分解样品,在碱性条件下用高锰酸钾将灰分溶液中的铬离子氧化为六价铬离子,再将溶液调至酸性,使六价铬离子与二苯卡巴肼(dipheny lcarbazide)生成玫瑰红色络合物进行比色测定,求得铬的含量。此法适用于饲料用水解皮革粉和配合饲料中铬的测定。
  2.测定
  (1)铬标准贮备液:称取0.283g经100~110℃烘至恒重的重铬酸钾,用水溶解,移人1 000ml容量瓶中,稀释至刻度,此溶液每毫升含0.1mg的铬。
  (2)铬标准溶液:根据需要,吸取适量铬标准贮备液于经校正后的100ml容量瓶中,加水稀释至刻度。
  (3)样品预处理
  ①灰化:称取1~1.5g样品,精确到0.001g,置于60ml瓷坩埚中,在电炉上炭化完全后,置于马福炉内,由室温开始,徐徐升温,于600℃灼烧5h,直至样品呈白色或灰白色无碳粒为止。
  ②工作液制备:取出冷却,加入5ml 0.5mol/L硫酸溶液,在电炉上微沸,内容物全部移人150ml三角瓶中,并用热水反复洗涤坩埚3~4次,洗涤液并人三角瓶中,加入1.5ml 4mol/L氢氧化钠溶液,再加入2滴2%高锰酸钾溶液,加水使瓶内溶液总体积约为60~70ml,摇匀,溶液呈紫红色,在电炉上加热煮沸20min(在煮沸过程中,如紫红色消褪,应即时补加高锰酸钾溶液,使溶液保持紫红色),然后沿壁加入3ml 95%的乙醇,摇匀,趁热过滤,滤液置于100ml容量瓶中,并用少量热水洗涤三角瓶和滤纸3~4次,洗涤液并人容量瓶中,此滤液即为试样溶液,备用。
  ③工作液与标准曲线的配套:铬的浓度仅在10~120μg/ml时符合朗·比尔定律,铬-二苯卡巴肼显色的光密度与溶液中的铬含量呈正相关。最高吸收峰在波长530~550nm处,但溶液中有Fe3+、Mn2+存在时,具有干扰作用。在配制标准溶液及制备工作液时,应严格掌握条件。
  (八)饲料中硒含量的测定

  1.原理 先将试样中有机物破坏,使硒游离出来,在微酸性溶液中硒和2,3-二氨基萘生成4,5-苯基苯并硒二唑,用环己烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取,用荧光光度计测定其荧光强度。
  2.测定
  (1)试剂和溶液
  ①盐酸羟胺(HG3-967-76)-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液:称取10gEDTA溶于500ml水中,加入25g盐酸羟胺使其溶解,用水稀至1 000ml。
  ②2,3-二氨基萘(DAN)溶液:称取DAN 0.1g于150ml烧杯中,加入100ml 0.1mol/L盐酸使其溶解,转移到250m1分液漏斗,加入20ml环己烷振荡1min,待分层后弃去环己烷,水相重复用环己烷处理2~3次。水相放人棕色瓶中上面加盖3mm厚的环己烷,于暗处保存,此液可使用数周。
  ③硒标准贮备溶液:称取硒粉(纯度99%以上)25mg(精确至0.01mg),移人100ml烧杯中,加入10ml硝酸加热溶解,冷至室温,用水转移至1000ml容量瓶中并稀至刻度,摇匀,此液lml含25μg的硒。
  ④硒标准工作溶液:吸取③溶液lml,放人50mi高型烧杯中,按分析步骤消化至高氯酸冒烟5min,取下稍冷,加lml水和lml盐酸摇匀,放置10min用盐酸转移至250ml容量瓶中,并稀至刻度摇匀,此液lml含硒0.1μg。
  ⑤甲酚红(HG3-1302-3)0.4g/L水溶液:称取0.1g甲酚红人400ml烧杯中,加少许水、加氨水,使其溶解,用水稀至250ml,摇匀。
  (2)步骤:对于每千克含硒在lmg以上含有机物的样品,按①进行至加入lml水和lml盐酸摇匀,放置10min后将消化液稀释至足够体积,然后取部分溶液(Se≤0.4μg)进行测定。对于以石粉为载体的预混料,称取1~5g样品(精确到0.0001g),于250ml烧杯中,加入20ml水和25ml硝酸(逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部加入),盖上表面皿,置电热板上煮沸,低温沸腾30min,取下冷却,用水转移到100~500ml容量瓶中稀释至刻度,摇匀,取部分澄清液(Se≤0.4μg )移人50ml高型烧杯中,加入5ml高氯酸,以下按①加高氯酸后程序进行。
  (3)曲线的绘制:取0ml、0.5ml、lml、1.5ml、2ml、3ml硒标准溶液,分别移人50ml具塞比色管中,加入3ml盐酸羟胺溶液、2滴甲酚红指示剂,以下按②一①用氨水中和起操作进行,以硒量为横坐标,荧光强度为纵坐标,绘制工作曲线。
  (九)饲料中六六六、滴滴涕含量的测定
  1.原理 试样中六六六、滴滴涕经正己烷、丙酮混合液提取、硫酸磺化、浓缩、脱水、净化后,用气相色谱电子捕获检测器检测,与标准比较定量。
  2.测定方法 净化柱用酸性硅藻土填充,然后用正已烷预淋,根据仪器的灵敏度,用异辛烷将六六六、滴滴涕标准品稀释至不同浓度,注入气相色谱仪,绘制相应的标准曲线。然后按同样程序测量各组分峰高或峰面积(参见中华人民共和国国家标准GB/T13090-1999)。
负责人熊本海博士



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